Хлорофилл — зеленый пигмент, обнаруженный в высших растениях и всех других фотосинтезирующих организмах. Хлорофилл A и хлорофилл B растворяются в этаноле, эфире, ацетоне и других растворителях, нерастворимы в воде и петролейном эфире, поэтому для извлечения хлорофилла можно использовать полярные растворители, такие как ацетон, метанол, этанол, этилацетат и т. д.
Процесс экстракции хлорофилла:
Экстракцию хлорофилла готовят в полу-темной комнате при температуре 25 градусов C. Этапы экстракции следующие:
(1) Возьмите 1000 граммов свежих зеленых листьев и измельчите их в кофемолке Векслера.
(2) Поместите измельченные 1000 граммов зеленых листьев в ацетон с небольшим количеством карбоната кальция (температура 20 градусов) для экстракции до тех пор, пока фрагменты листьев не станут бесцветными после фильтрации и очистки.
(3) Поместите отфильтрованный ацетоновый экстракт в воронку, содержащую 1 литр петролейного эфира и 100 мл ацетона, а затем осторожно вращайте, добавляя дистиллированную воду до расслаивания. Большая часть ацетона и водорастворимых примесей из водного слоя удаляется, остается только раствор петролейного эфира.
(4) После того, как раствор петролейного эфира снова очищается дистиллированной водой, его очищают более 5 раз 200 мл 80%-ного раствора метанола, содержащего петролейный эфир и 0,01 г щавелевой кислоты, и, наконец, получают желто--зеленую суспензию.
(5) Высушите суспензию безводным сульфатом натрия и профильтруйте ее в колонку из порошка сахарозы толщиной 3 см. Затем очистите выпавшие пигменты, чтобы удалить каротиноиды и сделать так, чтобы они содержали только природный хлорофилл.
(6) Колонка с сахарозой, содержащая природный хлорофилл, разделена на два слоя: зеленый слой имеет слой хлорофилла B толщиной 4–10 мм, другой синий слой представляет собой слой хлорофилла A толщиной 2–6 мм.
(7) Часть, расположенную в середине голубого слоя (около половины голубого слоя), помещают в эфир, суспензию фильтруют и экстрагируют, очищают дистиллированной водой, сушат сульфатом натрия и фильтруют на посуде с получением хлорофилла А.
(8) Удалите среднюю часть зеленого слоя (6) и быстро поместите его в эфир для фильтрации и промывки, чтобы получить эфирный раствор хлорофилла B.
Как отделить при экстракции?
Хроматография является важным методом разделения, очистки и идентификации органических соединений, особенно широко применяется при микроанализе. Пигменты фруктов и овощей в основном включают жирорастворимый каротин, лютеин, хлорофилл и водорастворимый антоциан. В экспериментах по экстракции мы можем использовать принцип фильтрации водо-растворимых антоцианов с одинаковой смешиваемостью, что, в свою очередь, позволяет использовать тонко-слойную хроматографию, колоночную хроматографию, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) для разделения бета-каротина, лютеина и хлорофилла, ослабленных из-за полярности трех типов пигментов, в свою очередь, можно соответствующим образом выбрать один органический растворитель или другое соотношение смешанных веществ. растворитель в качестве агента расширения и элюента. Определены оптимальные условия разделения.
